学 时：45学时
学 分：2.5学分
课程性质：必修
实验个数：12个
适用专业：生技
大纲执笔人：郭兴启
大纲审定人：王宪泽、王晓云
一、实验课的性质与任务
《基础生物化学实验》是基础生物化学教学的重要组成部分，生化实验技术已广泛用于生命科学许多领域的研究。随着生物化学的实验方法日趋专门化和复杂化，牵涉到生物化学实验工作的领域也越来越多。基础生物化学实验已经成为生物学类大学生必修的重要课程之一。
通过本课程的教学使学生了解生物大分子的分离和纯化方法，糖、蛋白质、核酸及主要次生代谢产物的定性、定量和有关生物化学性质的分析技术，酶活性测定、动力学分析和酶联免疫分析等知识和技能。培养学生严谨的科学态度及分析，解决问题的能力，同时通过实验加深学生对生物化学基本理论的理解。
二、实验目的与要求
通过本课程的学习，加深对生物化学基础理论、基本知识的理解，正确和较熟练地掌握比色、层析、电泳、离心等生物化学基本实验方法的原理和操作技能，提高观察、分析和解决问题的能力，培养学生严谨的工作作风和实事求是的科学态度，为学习专业课程和未来的科学研究及实际工作打下良好的基础。
三、实验项目及内容提要
1.实验理论
（1）Protein purification
（2）Chromatography
（3）Electrophoresis
（4）Protein sequencing or dry experiment
2.实验操作
| 基础生物化学实验 （课程代码） |
| 序号 | 实验名称 | 学时 | 必开 | 选开 | 实验类型 | 内容提要 |
| 验 证 | 基本 操作 | 综 合 | 设 计 |
| 1 | 纸层析分离氨基酸 | 3 | √ | | | √ | | | 采用单向或双向层析，根据氨基酸在展层剂的两相间分配系数不同，迁移率不同而将氨基酸分离开来。 |
| 2 | 蛋白质含量的测定 | 3 | √ | | | √ | | | 掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理及方法，熟悉分光光度计的使用方法。 |
| 3 | 酵母RNA的分离及鉴定 | 3 | √ | | | √ | | | 酵母中含有丰富的RNA，采用稀碱法破碎细胞壁，结合离心乙醇沉淀RNA，根据核酸中不同基团与试剂发生不同的反应来进行鉴定 |
| 4 | 淀粉酶活力的测定 | 3 | √ | | | √ | | | 掌握淀粉酶活力测定的原理与方法 。 |
| 5 | 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质 | 3 | √ | | | √ | | | 用醋酸纤维薄膜作为支持物，根据不同血清蛋白的等电点，分子大小不同，在电场中泳动速度不同，将清蛋白、球蛋白α、β、γ等分离开来。 |
| 6 | 糖酵解中间产物的鉴定 | 3 | √ | | | √ | | | 用酶的专一性抑制研究代谢的中间步骤，加强对糖酵解过程的感性认识。 |
| 7 | 过氧化氢酶Km值测定 | 3 | √ | | | √ | | | 进行酶活力测定和动力学实验，求出Km值。 |
| 8 | Vc含量测定 | 3 | √ | | | √ | | | 学习和掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中维生素C ( Vc )含量的原理和方法。 |
| 9 | 还原糖和总糖的测定 | 3 | √ | | | √ | | | 掌握3,5-二硝基水杨酸测定糖的原理和操作。 |
| 10 | 影响酶活力的因素 | 3 | √ | | | √ | | | 了解酶催化的高度专一性及温度、pH、抑制剂和激活剂对淀粉酶活性的影响，明确最适温度、最适pH及抑制作用和激活作用等概念。 |
| 11- 12 | 过氧化物同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 6 | √ | | | √ | | | 学习和掌握PAGE法分离过氧化物同工酶的原理。以小麦为材料，提取酶液、制备凝胶、电泳、染色、结果分析。 |
四、实验报告的格式
报告包括以下内容：
实验（编号） 实验名称
（一）实验目的
（二）实验原理 简要地用文字和化学反应式说明。
（三）主要试剂和仪器 列出实验中所要使用的主要试剂和仪器。
（四）实验步骤 应简明扼要地写出实验步骤流程。
（五）实验数据及结果处理
（六）问题讨论
五、本课程考核方式、方法及实验成绩评定方法
实验成绩评定方法：
实验课成绩单独按五级分记录考试成绩。凡平时实验成绩不及格者，不得参加期末考试，该门课程必须重修。该课程的成绩应以平时考查为主，占50%，期末考试成绩占50%。
评定各级成绩的标准：
（一）优秀
能正确理解实验的目的要求，能独立、顺利而正确地完成各项实验操作，会分析和处理实验中遇到的问题，能掌握所学的各项实验技能，能较好地完成实验报告及其它各项实验作业，有一定创造精神和能力。有良好的实验室工作作风和习惯。
（二）良好
能理解实验的目的和要求，能认真而正确地完成各项实验操作，能分析和处理实验中遇到的一些问题。能掌握所学实验技能的绝大部分，对难点较大的操作完成有困难。能一般完成实验报告和其它实验作业。有较好的实验习惯和工作作风。
（三）中等
能粗浅理解实验目的要求，能认真努力进行各项实验操作，但技巧较差。能分析和处理实验中一些较容易的问题，掌握实验技能的大部分。有30%掌握得不好。能一般完成各项实验作业和报告。处理问题缺乏条理。工作作风较好。能认真遵守各项规章制度。学习努力。
（四）及格
只能机械地了解实验内容，能一般按图、或按实验步骤“照方抓药”完成实验操作，能完成60%所学的实验技能，有些虽作但不准确。遇到问题常常缺乏解决的办法，在别人启发下能作些简单处理，但效果不理想。能一般完成实验报告，能认真遵守实验室各项规章制度，工作中有小的习惯性毛病（如工作无计划，处理问题缺乏条理）。
（五）不及格
盲目地“照方抓药”，只掌握50%的所学实验技能。有些实验虽能作，但一般效果不好，操作不正确。工作忙乱无条理。一般能遵守实验室规章制度，但常有小的错误。实验报告较多的时候有结果，遇到问题时说不明原因，在教师指导下也较难完成各项实验作业。
六、实验应配套的主要仪器设备及台（套）数（以一个实验教学班为标准）
恒温培养箱 1台
超净工作台 1台
冰箱 4台
灭菌消毒锅 1台
超低温冰箱 1台
冷冻离心机 2台
电子分析天平 4台
紫外分光光度计 1台
自动部分收集器 1台
自动凯氏定氮仪 1台
蛋白/核酸UV检测仪 2台
层析系统 1台
电泳仪及配套电泳槽 4套
纯水制备系统 1台
脱色摇床 1台
制冰机 1台
可调试微量移液器 8套
附：主要教材及参考书
1.使用教材：
王宪泽主编，生物化学实验技术原理和方法，中国农业出版社，2002.9
2.参考书目：
（１）文材基主编，基础生物化学实验，陕西科学技术出版社，西安，1995
（２）西北农业大学主编，基础生物化学实验指导，陕西科学技术出版社，1987
（３）周顺伍主编，生物化学实验技术，北京农业大学出版社，1991，北京
（４）李建武等合编，生物化学实验原理和方法，北京大学出版社，1994，北京
